Ett vaccin beroende av en lågmolekylär förening

Viktiga resultat som projektet gav

Överuttryck av replikasproteiner från koronavirus från plasmider i den heterologa bakterievärden (E. coli) och efterföljande rening visade sig svårare än vad som anges i källpublikationer. Vi klonade, transkriberade in vitro och renade ett känt RNA-substrat för förlängning av alla våra replikasproteiner (renade med & utan fusionstaggar) men ingen aktivitet sågs. Vi riktade sålunda T7 RNA pol istället & 4 kloner, var och en med en annan Trp-mutation, gjordes för att producera framtida resultat.

Långsiktiga effekter som förväntas

Levande försvagade vacciner (LAV) skulle vara tekniskt överlägsna inaktiva vacciner om de var säkrare. Den långsiktiga planen är att övervinna detta hinder genom att möjliggöra kontroll av LAV-replikering med en exogent tillsatt onaturlig, oralt tillgänglig liten molekyl. Denna princip bör möjliggöra billig och snabb vaccination av hela världens befolkning mot många sjukdomar istället för att för närvarande prioritera vaccination av bara den utvecklade världen.

Upplägg och genomförande

Målen var (i) att göra en liten molekylberoende COVID-replika & (ii) patentera denna. Överuttryck av replikasproteinerna i ett heterologt bakteriesystem från 4 tillgängliga plasmider visade sig svårare än vad som anges i 2 publikationer. Ingen förlängningsaktivitet av vårt renade replikas sågs med användning av ett RNA-substrat. Dessa oväntade resultat nödvändiggjorde subkloning & även inriktning på T7 RNA pol. Men projekttiden på nio månader var otillräcklig för att slutföra dessa nya planer.